产品货号：
KFS192
中文名称：
细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-bFluor488/PI双染)
英文名称：
Annexin V-bFlour488 Apoptosis/PI Detection Kit
产品规格：
10T|20T|50T|100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35～36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素keyFluor488标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
| 组分 | 10T | 20T | 50T | 100T | 保存 |
| Annexin V-bFluor488 | 50μL | 100μL | 250μL | 500μL | -20℃避光 |
| PI | 50μL | 100μL | 250μL | 500μL | 2～8℃避光 |
| Binding Buffer | 5mL | 10mL | 25mL | 50mL | 2～8℃ |
保存：-20℃，避光，有效期1年。
- Annexin V-bFluor488组份建议按需分装小份冻存于-20℃，避免反复冻融；
- Propidium Iodide和Binding Buffer组份不用时可放置于4℃保存，Propidium Iodide需要避光。
流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器。
1.5mL Microtube、载玻片、盖玻片(荧光显微镜观察需用)、PBS、不含EDTA的胰酶消化液。
- 微量试剂取用前请离心集液。
- Annexin V-bFluor488避光保存及使用。
- 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，不推荐用于检测组织样本。
- 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2% BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
- 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
- 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
- 悬浮细胞离心(2000rpm离心5min)收集；贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集；
注：胰酶消化时间不易过长，否则容易引起假阳性。 - 用PBS洗涤细胞二次(2000rpm离心5min)收集1～5×105细胞；
- 加入500μL的Binding Buffer悬浮细胞；
- 加入5μL Annexin V-bFluor488和5μL的PI，混匀；
- 室温、避光、反应5～15min；
- 请在1小时内，进行流式细胞仪的观察和检测。
- 流式细胞仪分析
- 用流式细胞仪检测，激发波长488nm，最大发射波长519nm，Annexin V-bFluor488的绿色荧光建议使用FL1通道检测。PI红色荧光(流式Ex=488nm,Em≥630nm)通过FL2或FL3通道检测，建议使用FL3。
- 荧光补偿调节：使用经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。
- 用流式细胞仪检测，激发波长488nm，最大发射波长519nm，Annexin V-bFluor488的绿色荧光建议使用FL1通道检测。PI红色荧光(流式Ex=488nm,Em≥630nm)通过FL2或FL3通道检测，建议使用FL3。
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